BIOTECNOLOGÍA

Identifican plantas editadas con CRISPR a través de fluorescencia DsRED

 

 

Investigadores de la Universidad Politécnica de Valencia en España y la Universidad de Durham en el Reino Unido han utilizado el sistema de clonación modular Golden Braid e incluyeron un módulo de monitoreo de transgenes dependiente de fluorescencia en la caja de herramientas de edición del genoma. La técnica se probó en tomate, arroz y Arabidopsis, mostrando que la visualización de fluorescencia DsRED funciona bien en semillas secas como marcador para la detección del transgen.

 

Se desmuestra así que este método es una forma eficiente de seleccionar semillas secas libres de transgenes. En la primera generación de segregantes nulos CRISPR-Cas9 libres de Ds-RED se detectó la edición de genes de objetivos seleccionados tales como mutantes homocigotos. Los resultados del estudio indican que la técnica permite la selección rápida de plantas de cultivo editadas homocigóticas libres de transgenes en una sola generación después de la transformación in vitro. Cabe mencionar que la fluorescencia DsRED no se ha descompuesto en las semillas de las tres especies almacenadas durante casi 2 años. La identificación de plantas mutantes homocigotas ha sido exitosa en todos los casos a pesar del uso de un bajo número de transformantes.

 

Hemos demostrado que el uso de fluorescencia DsRED como marcador seleccionable de transgén en semillas secas es un método efectivo que facilita la identificación de plantas de arroz y tomate editadas con CRISPR-Cas9 sin transgén en la segunda generación, minimizando la probabilidad de mutaciones fuera del objetivo. La selección de fluorescencia DsRED de semillas funciona en especies relacionadas con A. thaliana como Camelina sativa o Cardamine hirsuta. Sobre la posible interferencia, debido a la autofluorescencia en los tejidos vegetales, se deben evaluar diferentes proteínas fluorescentes para adaptar los vectores a diferentes especies con interés agronómico.

 

Los investigadores han demostrado que DsRED es una muy buena opción para el arroz y el tomate y probablemente para muchas especies, como lo demuestra un informe reciente con trigo (Okada et al., 2019). La limitación en muchos sistemas de vectores es una complicación a la hora de adaptarlo a nuevas especies, cambiar promotores y unidades transcripcionales. Este enfoque puede extenderse fácilmente a cultivos adicionales y plantas modelo, siempre que haya disponibles promotores óptimos.

 

 

 

Fuente: http://fundacion-antama.org/ 

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